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Standard prozesse für die PCR-Reaktion
Der Standard-PCR-Prozess ist in drei Schritte unterteilt:
DNA-Denaturierung: (90 ° c-96 ° C): Die doppels trängige DNA-Vorlage wird unter thermischer Wirkung einer Wasserstoff bindungs spaltung unterzogen und bildet einzels trängige DNA
Glühen: (60 ° c-65 ° C): Wenn die System temperatur abnimmt, bindet der Primer an die DNA-Matrize und bildet einen lokalen Doppelstrang.
Verlängerung: (70 ° c-75 ° c): Unter der Wirkung von Taq-Enzym (bei etwa 72 ° C, mit der besten Aktivität) wird dNTP als Ausgangs material verwendet, sich vom 3 'Ende des Primers in Richtung 5 '→ 3 'Ende erstrecken, um DNA-Stränge zu synthetisieren, die zur Matrize komplementär sind.
Nach jedem Zyklus der Denaturierung, des Glühens und der Verlängerung verdoppelt sich der DNA-Gehalt. Heutzutage kann sich eine gewisse PCR in kurzer Zeit replizieren, selbst wenn die Taq-Enzym aktivität aufgrund der kurzen Amplifi kation region nicht optimal ist. Daher kann eine zweistufige Methode verwendet werden, bei der gleichzeitig zwischen 60 und 65 ° C geglüht und gedehnt wird, um einen Temperatur anstieg zu verringern und den Prozess zu verringern und die Reaktions geschwindigkeit zu verbessern.
